纯氟油（yóu）Fluo-Oil 135(氟油3M Novec HFE7500电子氟化液的（de）替代品)

Fluo-Oil 135（简（jiǎn）称FO135） 是一种纯氟化油，可（kě）用（yòng）于替换氟油3M Novec HFE7500电（diàn）子（zǐ）氟化液。 Fluo-Oil 135氟油（yóu）的化学和物理化学性质与3M Novec HFE7500 相似，如下（xià）表所（suǒ）示（shì）:

优势

生物（wù）相容（róng）性、可重复（fù）性和稳定性（xìng）。

如何使用？

氟油（yóu）Fluo-Oil 135用于稀释FluoSurf Neat表（biǎo）面活性剂或（huò）已（yǐ）经用Fluo-Oil 135油稀（xī）释的表面活性剂。

（由于FluoSurf Neat表面活性剂是一种PFPE-PEG结（jié）构（gòu）的（de）复杂高效（xiào）纯表面活性（xìng）剂，因（yīn）为类似于PFPE-PEG结构的纯表面活性剂如（rú）FluoSurf Neat，Surf-Drop，PFPE-PEG-PFPE两嵌段或三嵌段表面活性剂，Surf 含氟表面活性（xìng）剂等，基本上都可以使（shǐ）用纯氟油Fluo-Oil 135进行稀释。稀释的浓度从0.2%到12%之间（jiān）。）

保（bǎo）存（cún）

室温下避光保存（cún）

安全注意事项

● 避免吸入、摄入和接触皮（pí）肤和眼睛

● 穿戴耐化学腐蚀的个人（rén）防护装备

● 戴上合适的（de）手套

● 穿合适（shì）的防护服

● 戴侧护罩（zhào）的安全眼镜

与3M HFE7500油（yóu）产生液滴性（xìng）能的（de）测试比（bǐ）较

分别用3M HFE7500和Fluo-Oil 135氟化油稀释FluoSurf neat表面活性剂，得到（dào）4w/w%的质量（liàng）浓度。

水滴产生或油包水液滴（dī）产生的两相（xiàng）流速：

油相流速（sù）为300μL/hr，水（shuǐ）相（xiàng）流速为100μL/hr。

水（shuǐ）相（xiàng）为（wéi）PBS溶液或100μM荧光素的PBS溶液（用于测（cè）试液滴的泄露）

倒置显微镜观察和Image J软件分析。

一（yī）、液滴尺寸及其（qí）分布

在Fluo-Oil 135和（hé）HFE7500油中，产生相似尺寸的水滴（dī）。在既定流（liú）速参数下（xià），液滴（dī）的平均直径为110μm。液（yè）滴尺寸的CV分别为2.3%（Fluo-Oil 135油）和2.9%（HFE7500油）。

二、液滴稳定性

大多数研究团（tuán）队使用（yòng）液滴微流体（tǐ）进行细胞封装（zhuāng）或 PCR 应用（yòng）。 因此，需要通过 PCR 的加热循（xún）环以（yǐ）及在 37°C 下（xià）长（zhǎng）期孵育来产生（shēng）稳（wěn）定的液滴。 表面活性剂的选择（zé）至关重要，但（dàn）选（xuǎn）择油（yóu）同样重要，以确保可重复的实验以及单（dān）分散液滴群的（de）生成（chéng）和保存。

分（fèn）别从（cóng）三个（gè）方面测试（shì）液滴的稳定性（xìng）：一是（shì）把液滴重新注入到玻璃（lí）观察腔室内（nèi）；二是经典（diǎn）的PCR热循环过（guò）程，循环过（guò）程30次，每次热循环为（wéi）98°C运行10s, 50°C运行5s, 72°C运行10s；三是置于（yú）37℃的培养箱内放置3天。对1万（wàn）个液滴（dī）进行分（fèn）析。

无论是在 Novec™ HFE 7500 还是 Fluo-Oil™ 135 中（zhōng）形成 FluoSurf™ 稳定的液滴，在（zài） PCR 加热循环后或（huò）在 37°C 孵育（yù） 3 天后（hòu），液滴平均尺寸在（zài）生成（chéng）时保持不变 [约 110μm (0.7nL)] 。此外，液滴种群（qún）仍然是单分散（sàn）的。 根据统计（jì）分析，计算出在加热循环后，只有（yǒu） 5% 的整体液（yè）滴的（de）大（dà）小与平均（jun1）初始液滴（dī）直径的差异超过（guò） 10%。

将（jiāng）氟化油从 Novec™ HFE 7500 切换（huàn）到 Fluo-Oil™ 135 对液滴稳定性没有（yǒu）影响。

三、液滴内的分子（zǐ）滞留（liú）

基于液滴的（de）化学或（huò）生化分析依赖于试剂在单个液滴（dī）中保持隔离。 泄漏到连续相和液滴之间的交换（huàn），即使很低（dī），也会影响结果的（de）完整性（xìng），因此，分子保（bǎo）留是选择氟化油时（shí）要考虑（lǜ）的重要参数。 众所周（zhōu）知，氟化油（yóu）会限（xiàn）制液（yè）滴（dī）之间的分子交换（huàn），因此应验证切换油的影响。

同时（shí）生成（chéng）两种油包水乳液[“空”（负载 PBS）和（hé）“满”（负（fù）载荧光素）液滴]，一次使用 Novec™ HFE7500，然（rán）后使用 Fluo-Oil™ 135 作（zuò）为连续相。 两种（zhǒng）混合物，每一种都（dōu）包（bāo）含两个（gè）种群（qún），在（zài） 37°C 下孵育，并在（zài）不（bú）同的时（shí）间点拍摄照（zhào）片。 使用 ImageJ 软件（jiàn）对（duì）液滴内荧光强度的演变（biàn）进行（háng）了（le）统计定量分析。

上（shàng）图（tú）显（xiǎn）示了两个群（qún）体之间平均荧光强度（dù）差异的演变（染料加载和空液滴）以及在初始时间（jiān）点和 48 小时（shí）后（hòu）相关的荧光和明场图片。

在 24 小（xiǎo）时的过程中（zhōng），两种氟化（huà）油产生的液（yè）滴（dī）中荧光素的泄漏率相（xiàng）似（约 15% 泄漏），并且在 Fluo-Oil™ 135 中产生液滴的（de）情况下保持（chí）恒定 3 天。相反，在 24 小（xiǎo）时后， Novec™ HFE7500 中液滴的泄漏继续减（jiǎn）少并（bìng）达到 30% 左右。 这（zhè）种（zhǒng）较长孵育时（shí）间的（de）较差保留性能可归因于（yú）后一种油的（de）粘度（dù）略低，加速了液滴之间更快（kuài）的分子交换。

结（jié）论

对于基于液滴的微流体应用，从一种（zhǒng）氟化油类型切（qiē）换到另一种类型可能会对微（wēi）流体实验（yàn）的过程产生（shēng）重大影（yǐng）响，尤其是对（duì）液滴（dī）的有（yǒu）效生成产生（shēng）重大影响。 在（zài）氟油（yóu）3M Novec™ HFE7500电子氟化液 和 氟油Fluo-Oil™ 135 的情况下，已证（zhèng）实更换这两种氟化油对（duì）实验条件和结（jié）果没（méi）有影响。 当（dāng）使（shǐ）用（yòng） Fluo-Oil™ 135 作为连续（xù）相时，甚至可以观察到荧光素在液滴内的更好保（bǎo）留。

氟化油Fluo-Oil™ 135 是用于（yú）液滴微流（liú）体应（yīng）用（yòng）的3M Novec™ HFE7500 氟油 的有效替代品。